電泳儀設(shè)置(電泳儀設(shè)置多少電流合適)
凝膠電泳跑膠速度慢的原因分析:
1.電泳液的情況:如果緩沖液用了很多次,離子強(qiáng)度會(huì)不夠,造成電阻過(guò)大,系統(tǒng)產(chǎn)熱,影響電泳速度的問(wèn)題。如果是新配置的,需要倒回頭再確認(rèn)一下,緩沖液的濃度,確認(rèn)稀釋到1X使用,pH值是不是對(duì)的,再用pH劑測(cè)測(cè)看。如果這些都沒(méi)問(wèn)題。
2.電泳槽和電泳儀:電壓和電流與平時(shí)是否正常,如果不正常,使用確保正常的電泳液再測(cè)試,是電泳槽的電極絲是不是有問(wèn)題,或者是電泳儀。
3.要是剛好其他人都驗(yàn)證過(guò),上述幾個(gè)點(diǎn)都o(jì)k,那就要檢查膠了。
2. 使用電泳儀應(yīng)注意什么1、首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接,注意極性不要接反。
2、Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀電源開(kāi)關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,電壓旋鈕轉(zhuǎn)到小,根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3、接通電源,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止,設(shè)定電泳終止時(shí)間,此時(shí)電泳即開(kāi)始進(jìn)行。
4、Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀工作完畢后,應(yīng)將各旋鈕、開(kāi)關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài),并撥出電泳插頭。
二、Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀操作注意事項(xiàng):
1、Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應(yīng)先斷電,以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2、Bio-Rad伯樂(lè)電泳儀通電后,不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3、由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同,其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。
3. 電泳儀的參數(shù)設(shè)定全自動(dòng)電泳儀技術(shù)參數(shù)1、電泳介質(zhì):瓊脂糖凝膠2、整套系統(tǒng)須為全自動(dòng)分析系系統(tǒng):點(diǎn)樣、電泳孵育、染色、脫色、烘干能在同一儀器中進(jìn)行3、點(diǎn)樣方式:機(jī)內(nèi)自動(dòng)點(diǎn)樣、一次點(diǎn)樣成功、無(wú)需重復(fù)點(diǎn)樣。
4、加樣系統(tǒng):采用一次性加樣梳,避免了樣品間交叉污染。試劑盒內(nèi)配備,無(wú)需另購(gòu)。
5、加樣量:≤40μl/標(biāo)本6、檢測(cè)項(xiàng)目:≧6項(xiàng)7、*檢測(cè)項(xiàng)目:血清蛋白、★免疫固定、★腦脊液、本周氏蛋白、★尿蛋白(可按分子量大小排列),同工酶等。
8、電腦部分:電腦為品牌機(jī),CPU:P4,內(nèi)存:2G,硬盤(pán):500G,17寸液晶顯示器,數(shù)據(jù)可聯(lián)網(wǎng)9、分析軟件:WINDOWSXP操作平臺(tái),具有中文分析軟件系統(tǒng),并能與醫(yī)院計(jì)算機(jī)中心聯(lián)網(wǎng)。
4. 電泳儀參數(shù)設(shè)置電泳儀是可橫流同時(shí)又可恒壓,當(dāng)設(shè)定恒流數(shù)值20ma,啟動(dòng)初時(shí)電泳槽負(fù)載阻抗低,隨工作時(shí)間阻抗增高電流下降,為保持恒流值不變,電源電壓升高,當(dāng)電壓升到電源最高電壓后保持不變,隨時(shí)間電流會(huì)下降;根據(jù)歐姆定律U=IR計(jì)算可知
5. 電泳儀電流方向電泳時(shí)的電流大小和你的工件密度有關(guān)系,你電泳的工件面積大,則電泳時(shí)的電流就會(huì)相應(yīng)的大,還有如果是連續(xù)式的,電泳的密度差不多的話(huà)則是比較平的直線,如果是間歇式的則會(huì)是一個(gè)一下沖到頂?shù)碾娏?,然后平穩(wěn)下降,
另外查一下陽(yáng)極板的完整度,陽(yáng)極液的電導(dǎo)率,
6. 電泳時(shí)電流應(yīng)該設(shè)置多少電泳被擊穿主要是電壓太高了,也和極距有些關(guān)系,他與電壓成正比,與極距成反比。
一般電泳得擊穿電泳都在300v以上,電壓大小問(wèn)題可以排除,你看看你們的電泳極距,有沒(méi)有太小,還有就是你們的工件太薄,電壓有可能不是漸變的,而是瞬間達(dá)到90v,在剛接通電壓時(shí),由于工件表面沒(méi)有附著油漆,電阻值很小,電泳電流值會(huì)很大,很容易擊穿,我們公司的電壓是在工件到位后,漸變?cè)黾拥?,只用一段電壓?60v,沒(méi)有擊穿現(xiàn)象
7. 電泳儀如何設(shè)置恒流可以有恒壓或者恒流兩種選擇,一般情況下選擇恒壓的更多見(jiàn)。對(duì)于一般的5000bp以下的條帶用1.5%的膠選擇200V,電泳時(shí)間20min左右就可以了。但是對(duì)于較大的片段(5000+bp)要選擇濃度1%的膠,也可以用200v,電泳約15-25min。
另外對(duì)于不同大小的dna,膠的濃度的選擇比電泳參數(shù)更重要,另外要想跑的條帶好看一些,要盡量讓電泳的電壓保持在150-200V之間,電泳的時(shí)間盡量讓marker跑開(kāi)就可以了。
8. 電泳儀電壓電流設(shè)置1、首先利用萬(wàn)用表檢查電泳儀有無(wú)輸出電壓(注意選擇直流電壓擋,輸出不得超過(guò)量程,以免損壞萬(wàn)用表)
2、利用萬(wàn)用表電阻擋檢查電泳輸出線是否導(dǎo)通。
3、利用萬(wàn)用表電阻擋檢查電泳槽電極插座與鉑金絲之間是否可靠導(dǎo)通,重點(diǎn)檢查輸出插座與插頭是否與連接鉑金絲的焊片緊密連接,如發(fā)現(xiàn)松動(dòng)請(qǐng)使用尖嘴鉗將其緊固即可,完畢進(jìn)行檢測(cè)若還沒(méi)有電流則檢查鉑金絲是否斷裂,若鉑金絲有斷裂跡象則用電烙鐵將其焊接,首先將助焊劑涂在鉑金絲上再用電烙鐵粘上焊錫將斷裂的兩段鉑金絲焊連即可。
9. 電泳儀設(shè)置多少電流合適呢蛋白電泳用電流跑20ma電流
10. 電泳儀輸出電流計(jì)算在電泳的過(guò)程中,電壓和電流的大小與板的長(zhǎng)度,緩沖液的pH,離子強(qiáng)度等很多因素都有關(guān)系,而且二者之間又有互相制約的關(guān)系。
所以都不同。一般的電泳儀,可調(diào)的都是最大電壓和最大電流跑電泳的時(shí)候電壓和電流二者很難同時(shí)都達(dá)到你設(shè)定的值。跑電泳的時(shí)候只要確定是恒壓還是恒流就可以了,個(gè)人認(rèn)為二者沒(méi)有大的差異,只要電壓和電流都達(dá)到了一定的值,都是可以跑出好效果的。(網(wǎng)上搜的自己改了一下 )
11. 電泳設(shè)置多少電壓電泳電壓標(biāo)準(zhǔn)的制定方法如下:
看電泳槽多大,兩電極直接的距離,每cm 3~5V。例如一個(gè)20cm的電泳槽,電壓就應(yīng)該設(shè)為60~100V間。電壓大,速度就快。
還要考慮DNA長(zhǎng)度,小片段DNA適宜用比較低的電壓。DNA分子提取得到以后,需要通過(guò)電泳技術(shù)來(lái)檢測(cè)其數(shù)量和質(zhì)量。